細(xì)胞毒性檢測(cè)是生物相容性測(cè)試的一種，檢測(cè)藥物或者新型材料在生物環(huán)境中的毒性情況，即通過(guò)檢測(cè)材料或者藥物對(duì)細(xì)胞的增殖或者生長(zhǎng)的影響，來(lái)評(píng)價(jià)藥物或材料的毒性或者活性，主要用于藥物活性篩選、細(xì)胞增殖/毒性測(cè)定、抗腫瘤藥效計(jì)算IC50等；常用MTT法或者CCK8法檢測(cè)，另外也可以通過(guò)Live/dead雙染法進(jìn)行細(xì)胞成像，更直觀的記錄細(xì)胞的存活情況。
1.CCK-8測(cè)試
    實(shí)驗(yàn)原理：CCK-8試劑（Cell Counting Kit-8 細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑）中含有WST–8（2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽），它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪 硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan），生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。注：貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞均可使用此方法，懸浮細(xì)胞CCK-8孵育時(shí)間應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)。
   服務(wù)流程：

2.MTT測(cè)試
    實(shí)驗(yàn)原理：活細(xì)胞線粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原成水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能；二甲基亞砜能溶解細(xì)胞中的甲臢，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比，使用多功能酶標(biāo)儀在490nm處測(cè)定其吸光值，從而定量測(cè)定細(xì)胞的存活比例。注：多用于貼壁細(xì)胞。
    服務(wù)流程：

3、Live/Dead細(xì)胞染色
    活/死細(xì)胞復(fù)染試劑盒可同時(shí)對(duì)活細(xì)胞和死細(xì)胞進(jìn)行熒光染色。該試劑盒包含鈣黃綠素-AM和碘化丙啶(PI)兩種溶液，分別用于染色活細(xì)胞和死細(xì)胞。其中鈣黃綠素-AM，即鈣黃綠素的乙酰羥甲基酯，具有高度親脂性和細(xì)胞膜透過(guò)性。盡管鈣黃綠素-AM自身并非熒光分子，但活細(xì)胞中的酯酶可以催化鈣黃綠素-AM生成鈣黃綠素，從而發(fā)出強(qiáng)烈的綠色熒光(λex 490 nm, λem 515 nm). 因此鈣黃綠素-AM只能染色活細(xì)胞。而核染色染料PI不能透過(guò)活細(xì)胞的細(xì)胞膜。但可以透過(guò)死細(xì)胞膜的變性區(qū)域來(lái)到達(dá)細(xì)胞核，并與細(xì)胞中的DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)結(jié)合，從而發(fā)出紅色熒光(λex 535 nm, λem 617 nm)。鈣黃綠素和PI-DNA都能被490nm波長(zhǎng)的光激發(fā)，因此可以采用熒光顯微鏡同時(shí)監(jiān)測(cè)活細(xì)胞和死細(xì)胞。使用λex激發(fā)光時(shí)只能觀察到死亡細(xì)胞。
    服務(wù)流程：

 

1.液體類
根據(jù)測(cè)試時(shí)樣本濃度和檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)而定，按照單次檢測(cè)需要的3-5倍的量寄送；若采用稀釋后樣本測(cè)試，則須告知稀釋倍數(shù)及工作液濃度；若溶劑為有機(jī)溶劑（如DMSO，醇類，酚類等），z高工作液濃度中，溶劑的占比低于0.5%。
2.粉末類
根據(jù)測(cè)試時(shí)樣本濃度和檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)而定，按照單次檢測(cè)需要的3-5倍的量寄送；
    a. 可溶性粉末：注明溶劑的種類（如無(wú)水乙醇，異丙醇，DMSO，培養(yǎng)基，PBS或者生鹽水等），當(dāng)樣品對(duì)溶劑有特殊需求時(shí)，請(qǐng)?jiān)谒蜆訒r(shí)附加所需溶劑；
    b. 不可溶粉末：注明樣本性質(zhì)，滅菌方式，及分散為均勻懸浮液所需必要步驟，
     如果不可使用分散液，需要預(yù)試，樣本量可跟前期對(duì)接技術(shù)顧問(wèn)溝通確認(rèn)。
3.塊體類
    a. 樣品與細(xì)胞的作用方式為直接接觸的話，至少3個(gè)/種細(xì)胞/時(shí)間點(diǎn)；
    b.樣本處理方式為浸提的話，可參考國(guó)標(biāo)ISO 10993-12 2007中的浸提方式浸提，根據(jù)浸提方式按量和檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)提供；
    c.若是需要把細(xì)胞接種到材料上的話，金屬塊、凝膠類樣本須制備成統(tǒng)一大小的圓形/方形，建議制備直徑為5-7 mm圓形。布料、紙片類樣本可代為裁剪，默認(rèn)制備直徑為6 mm。

 

1、細(xì)胞毒性交付結(jié)果
將各組吸光度值輸入Excel并計(jì)算相對(duì)活力（相對(duì)活力%=（實(shí)驗(yàn)組OD值-背景OD值）/（對(duì)照組OD值均值-背景OD值）×100），其中背景OD值為只加CCK8/MTT試劑和培養(yǎng)基的吸光度。將相對(duì)活力數(shù)值輸入GraphPad Prism作圖，結(jié)果如下：

2、細(xì)胞死活染色交付結(jié)果
1. 交付內(nèi)容
熒光顯微鏡，共聚焦可任選其一進(jìn)行拍攝，一般提供5-6個(gè)視野，可選擇不同倍數(shù)，需要了解詳細(xì)的結(jié)果形式，請(qǐng)聯(lián)系我們工作人員
2、結(jié)果展示